Conocimientos previos
Descripción
Se le llama extracción al método por el cual se obtiene el ADN a partir de material biológico (ej.: cepillado bucal, saliva , sangre o cualquier tejido) utilizando técnicas físicas y químicas. La extracción consiste en la separación y purificación del ADN con el fin de poder estudiarlo, analizarlo o manipularlo. En la investigación biomédica el ADN se utiliza para analizar y diagnosticar a pacientes con enfermedades neurodegenerativas, cáncer, infecciones, etc.
Material
Material biológico: organismos (bacterias, hongos, protozoarios, etc.), células, tejidos, organos.
Guantes de nitrilo/latex: ayuda a proteger la degradación de la muestra y protegernos de contaminación en caso de muestras biológico infecciosas
Proteasas: sirven para la degradación de proteínas
Centrífuga: equipo que ayuda a acelerar el proceso de separación de componentes de diferentes densidades por medio de una fuerza giratoria.
RNAsa: enzima que degrada ARN.
Espectrofotómetro: equipo que sirve para medir la concentración de sustancias como ácidos nucleicos entre otras moléculas.
Pasas generales en un laboratorio
- Obtención de la muestra celular
- Lisis celular: es el proceso físico o químico por el cual se rompen las membranas para liberar sus componentes celulares.
- Degradación de proteínas: se rompen las proteínas que cubren al ADN usando proteasas.
- Procesos de Separación: procesos físicos o químicos mediante los cuales se separan diferentes componentes celulares como lípidos, proteínas, ARN, ADN y moléculas pequeñas. Para esto se usa una centrífuga.
- Degradación de ARN por RNAsa: proceso que rompe específicamente cadenas ARN remanente con el fin de evitar contaminación de este material.
- Cuantificación de ADN: técnica mediante la cual se mide la concentración del material genético usando un espectrofotómetro.
Procedimiento para una extracción casera:
Material
- 1 bolsa de plástico con cierre (tamaño para sándwich)
- 1 fresas grande o 2 pequeñas (frescas o congeladas)
- 2 cucharaditas de detergente para platos
- 1 cucharadita de sal
- ½ taza de agua
- 2 vasos chicos
- 1 filtro de café
- 1L de Alcohol 96% o alcohol del 96°
- 1 palo de paleta de madera o agitador de café de plástico
Procedimiento
- Coloca una fresa grande o dos pequeñas y retirale las hojas verdes que puedan quedar en la fruta.
- Colocalas en la bolsa de plástico, retire el aire y séllela para que puedas romperalas suavemente las fresas dentro de la bolsa durante unos dos minutos. Triturar completamente las fresas.
- Buffer de extracción de ADN: En un vaso mezcle 2 cucharaditas de detergente, 1 cucharadita de sal y ½ taza de agua.
- Agregue 2 cucharaditas del líquido buffer de extracción a la bolsa con las fresas trituradas.
- Vuelva a sellar la bolsa y aplaste suavemente durante 1 min. NOTA: Evite hacer muchas burbujas.
- Coloque el filtro de café dentro del otro vaso
- Abra la bolsa y vierta el líquido de fresa en el filtro. Puede exprimir suavemente hasta obtener el líquido restante.
- Luego, vierta por las paredes del vaso el alcohol frío con una cantidad igual al del líquido con fresa . NOTA: No mezcle ni revuelva, solo deja que la mezcla repose por unos segundos.
- En unos segundos, observe el desarrollo de una sustancia turbia blanca (ADN) en la capa superior sobre la capa de extracto de fresa.
- Incline el vaso y recoja el ADN con un palo de madera.
- Separe el ADN del resto del material contenido en las células de la fresa
Resultado
Fragmentos de ADN provenientes de nuestro material biológico. Para más detalles ver:
StrawberryExtractionInstructions
Fuentes de error más frecuentes en el laboratorio
Cuando se trabaja en laboratorio todos los materiales y reactivos que se usan para la extracción deberán estar limpios y esterilizados. Además, deben estar libres de nucleasas, con el fin de evitar la degradación de ADN.
Métodos relacionados
qPCR o PCR en tiempo real
Temas relacionados
Cómo citar: Checa Rojas, A. (2016, 22 de Junio ) Extracción de ADN. Conogasi, Conocimiento para la vida. Fecha de consulta: Diciembre 21, 2024
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1 Comentario en "Extracción de ADN"
gracias por dar el formato apa listo